Иммуногистохимия

Как проводится иммуногистохимия

Для проведения исследования требуется фрагмент эндометрия, который получают во время проведения биопсии (раздельного диагностического выскабливания или пайпель-биопсии). Этот материал помещается в забуференный формалин и направляется в лабораторию, где проходит несколько этапов обработки:

1. Фиксация и проводка. Эти процедуры необходимы, чтобы сохранить структуру ткани максимально неповрежденной.
2. Изготовление парафиновых блоков. Подготовленный материал заливают парафином. С этого момента блок может храниться неограниченное количество времени, не теряя своих свойств. При необходимости, в любой момент из него могут быть приготовлены гистологические препараты.
3. Изготовление гистологических препаратов. Ткань нарезают с помощью микротома на тонкие пластинки, толщиной несколько микрометров (это в десятки раз меньше, чем толщина волоса), фиксируют на стекле и окрашивают красителями для гистологического и иммуногистохимического исследования.
4. На финальной стадии препараты оценивает врач-патоморфолог.

В заключении выдаются результаты как гистологического, так и иммуногистохимического исследования. На этом основании лечащий врач выбирает оптимальный метод лечения.

Как забеременеть в 35?

По рекомендациям ВОЗ оптимальным возрастом для беременности является промежуток от 20 до 30 лет, однако по разным причинам женщины могут планировать ее позже.

Лечение бесплодия у женщин

В наше время бесплодие является не только медицинской, но и социальной проблемой.

Повышенный уровень тестостерона у женщин

Тестостерон — один из главных мужских гормонов, однако в определенном количестве он вырабатывается яичниками и надпочечниками у женщин.

Стимуляция овуляции

Роль PD-L1 в патогенезе злокачественных образований

Воздействие на сигнальный путь иммунной контрольной точки PD-1:PD-L1 лежит в основе иммунной терапии рака легкого, молочной железы, уротелиального рака и других злокачественных новообразований. Воздействие направлено на рецептор PD-1 и его лиганды PD-L1 и PD-L2. Наиболее важная роль в ускользании опухоли от иммунного ответа отводится взаимодействию рецептора PD-1 и лиганда PD-L1.

Длительная антигенная стимуляция, часто наблюдаемая при опухолевых заболеваниях, приводит к устойчивой экспрессии рецептора PD-1 на T-лимфоцитах и повышению экспрессии лигандов PD-L1 на опухолевых и иммунных клетках. Таким образом, опухоль вырабатывает механизм ускользания от иммунного ответа посредством гиперэкспрессии лиганда PD-L1, который, связываясь с рецептором PD-1 на T-лимфоцитах, нарушает их цитотоксическую активность (рис.2).

Рисунок 2. Сигнальный путь PD-1:PD-L1, инактивирующий действие Т-лимфоцитов.

Описание

Иммуногистохимическое исследование пролиферативной активности по экспрессии Ki-67 (1 антитело) — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Анализ выполняется для определения активного роста опухоли.
ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования.Иммуногистохимическое исследование  
Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс «антиген-антитело». Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов.
Иммуногистохимическое исследование полученного материала включает определение наличия Ki-67 и в случае положительного ответа оценку его экспрессии.Ki-67 
Ki-67 — это маркёр пролиферативной активности опухоли. Антиген экспрессируется только во время деления клетки, в периоде её покоя маркёр отсутствует. Ki-67 является предсказывающим фактором — он определяет насколько агрессивен рост опухоли. Чем выше процент пролиферативной активности, тем с большей вероятностью опухоль ответит на химиотерапевтическое лечение. При низком уровне данного показателя опухоль в большей мере отреагирует на гормонотерапию.
Показатели процентной активности для каждой опухоли индивидуальные, они определяются локализацией патологического процесса.Показания к проведению ИГХ-исследования:

• рак любой локализации;
• подозрение на наличие опухолевого роста в организме;
• доброкачественные образования с целью исключения озлокачествления;
• опухоль молочной железы для оценки возможности лечения гормонами.

Подготовка
Материалом для исследования являются парафиновый блок и предметные стёкла. В случае если материалом является образец ткани в растворе формалина, дополнительно должна быть выполнена услуга изготовления стёкол.
При проведении гистологического исследования в сторонней лаборатории необходимо обязательно предоставить протокол гистологического исследования.Интерпретация результатов
Ответ выдается в виде описания микропрепарата, применяемых красителей и заключения. В заключении указывается индекс белка ki-67 в случае положительной реакции. Заключение может интерпретировать только врач, направивший на проведение исследования.

Виды

Выделяют два метода ИГХ-изучения – прямой и непрямой.

При прямом нужен один вид молекул-антител. Молекулы эти взаимодействуют с молекулой, которая является мишенью. Если эта патогенная частица присутствует в ткани и есть реакция, опухолевая ткань окрашивается.

Чаще применяют непрямой вид. Здесь необходимы две cellula. Первая начинает взаимодействовать с частицей атипичной, вторая вступает во взаимодействие с полученным комплексом «атипичная cellula – антитело». Маркер, который изменил свой цвет, связывают со второй частицей.

У непрямого ИГХ-изучения есть неоспоримое преимущество – чувствительность его более выше.

Еще одно преимущество в том, что для проведения диагностики по второму виду, нужно ограниченное количество молекулярного материала.

Что представляет собой лиганд программируемой клеточной гибели PD-L1?

• PD-L1 – трансмембранный белок, лиганд к рецептору PD-1. При связывании с рецептором PD-1 на цитотоксических лимфоцитах блокирует их цитотоксическую активность
• В норме участвует в физиологическом механизме подавления аутоиммунных реакций
• При экспрессии PD-L1 опухолевыми клетками данный лиганд участвует в механизмах ускользания опухоли от иммунного контроля (рис.1)

PD-L1 – лиганд рецептора программируемой клеточной гибели 1 (PD-1). Это трансмембранный белок с молекулярной массой 40 кДа, экспрессируемый на T- и B-лимфоцитах, NK-клетках, дендритных клетках, макрофагах, мезенхимальных стволовых клетках. PD-L1 способен связываться не только с рецептором PD-1, но и обладает сродством к CD80 (B 7.1) – белку, находящемуся на поверхности дендритных клеток, активированных B-клеток и моноцитов, который стимулирует активацию и выживаемость Т-лимфоцитов путем взаимодействия с CD28 на их поверхности. Лиганд PD-L1 способен угнетать этот процесс путем конкурентного связывания с CD80. На рисунке 1 представлены межклеточные взаимодействия (активирующие и ингибирующие сигналы) между Т-лимфоцитом и антигенпрезентирующей клеткой.

Рисунок 1. PD-1/PD-L1 сигнальный каскад в межклеточном взаимодействии иммунокомпетентных клеток. При связывании лиганда PD-L1 (лиганд рецептора программируемой клеточной смерти 1, также называемого PD-1) с рецепторами PD-1 и B7.1, находящимися на Т-лимфоцитах, происходит угнетение цитотоксической активности Т-лимфоцитов.

Описание

Иммуногистохимическая диагностика опухоли предстательной железы (Ck-5, P-53, AMACR) — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Анализ выполняется для определения степени выраженности опухоли предстательной железы.
ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования.Иммуногистохимическое исследование 
Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс антиген-антитело. Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркёром. Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов.Рак предстательной железыДля проведения иммуноморфологического анализа используются маркёры рака предстательной железы. Их можно условно поделить на два типа:

• Маркёры, которые используются для подтверждения диагноза РПЖ.
• Маркёры, которые определяют степень злокачественности РПЖ.

Ск-5 
К первой группе относятся цитокератины. Повышенная экспрессия цитокератина Ск-5 может указывать на развитие низкодифференцированной аденокарциномы простаты. Р-53
Маркёр Р-53 представляет собой белок, который контролирует протекание процессов клеточного цикла. Кроме этого, он следит за наличием повреждений в геноме, которые впоследствии могут привести к развитию патологического процесса. Повышение уровня онкомаркёра Р-53 может свидетельствовать о развитии рака простаты.Альфа-метилацил-КоА-рацемаза (AMACR)
Альфа-метилацил-КоА-рацемаза (AMACR) представляет собой митохондриальный и пероксисомальный фермент, который сверхэкспрессируется при раке предстательной железы. Иммуногистохимия с использованием анти-анти-AMACR/P504S полезна для выявления рака простаты во всём спектре образцов её ткани, будь то игольная биопсия, трансуретральная трепан-биопсия или простатэктомия.Показания к проведению ИГХ-исследования:

определение гистологического типа опухоли, если предыдущие рутинные анализы не дали точных результатов;
определение степени злокачественности новообразования, что крайне важно при составлении протокола лечения;
определение распространённости опухоли в лимфатические узлы, а также другие органы и ткани;
подбор метода иммунологического лечения, различающегося при разных фенотипах опухолей.

Подготовка
Подготовка определяется лечащим врачом.Интерпретация результатов
Ответ выдается в виде описания микропрепарата, применяемых красителей и заключения. Заключение может интерпретировать только врач, направивший на проведение исследования.

Применение технологии в репродуктивной медицине

Иммуногистохимия в репродуктивной медицине применяется для диагностики причин бесплодия и оценки потенциальной эффективности ЭКО. Известно, что беременность при применении вспомогательных репродуктивных технологий наступает у 35–45 % пациенток после первой попытки. Около 30 % пациенток имеют многократные неудачи, причины которых различны, в том числе неблагоприятное состояние эндометрия.

Долгое время для изучения патологии эндометрия использовался гистологический метод исследования. Однако он не позволял достоверно оценить рецептивную способность эндометрия, что породило потребность в поиске более информативных методов диагностики. Одним из них стала иммуногистохимия, которую в настоящее время используют в следующих целях:

1. Исследование структурных особенностей эндометрия.
2. Определение способности эндометрия к имплантации.
3. Определение негативных факторов наступления беременности, например, гиперэкспрессии альфа-эстрогеновых рецепторов в железистых и стромальных клетках в среднелютеиновую фазу, снижение прогестерон+ стромальных клеток.
4. Определение благоприятных факторов наступления беременности — оптимальное соотношение прогестероновых и эстрогеновых рецепторов, количество эндометриальных эпителиоцитов с пиноподиями более 50 %.
5. Оценка восприимчивости эндометрия к гормонам. На основании полученной информации корректируют дозу гормональных препаратов, используемых на этапах планирования и проведения ЭКО.
6. Определение иммунокомпетентных клеток-киллеров, препятствующих наступлению беременности.

Экспертное мнение врача

Сараева О.В.
Акушер -гинеколог, репродуктолог. Гинеколог-эндокринолог. Врач высшей категории. Кандидат медицинских наук.

Иммуногистохимия представляет собой гораздо более информативный метод диагностики, чем классическая гистология. Методика позволяет с точностью определить состояние эндометрия и выявить причины бесплодия или множественных неудач ЭКО. Кроме того, она может использоваться в прогнозировании результатов экстракорпорального оплодотворения. Несмотря на относительную техническую сложность реализации, иммуногистохимические исследования получают все большее распространение в сфере репродуктивной медицины.

ТНРМЖ: методы определения экспрессии PD-L1

Тройной негативный рак молочной железы – самая агрессивная форма среди рака молочной железы . Традиционно применяемая химиотерапия не позволяла достичь значимого увеличения продолжительности жизни свыше медианы в 18 месяцев. Появление анти-PD-L1 терапии, с одной стороны, позволило преодолеть медиану общей выживаемости в 2 года, а с другой стороны – для назначения терапии необходимо выделить группу PD-L1 позитивных пациентов. В отличие от уротелиального рака, назначение анти-PD-L1 терапии обязательно требует тестирования пациенток с тройным негативным раком молочной железы.

Какой метод используется для определения экспрессии PD-L1 у пациентов с ТНРМЖ?

При определении статуса PD-L1 для решения вопроса об иммунотерапии важно выбрать оптимальный метод. Тест VENTANA PD-L1 (SP142) позволяет идентифицировать пациентов с тройным негативным раком молочной железы (ТНРМЖ), которые могут получать анти-PD-L1 терпию

Ткани пациентов с ТНРМЖ, окрашенные с использованием теста VENTANA PD-L1 (SP142), оценивают по окрашиванию инфильтрирующих опухоль иммунных клеток (IC). IC – это иммунные клетки, присутствующие в интратуморальной и прилегающей перитуморальной строме. В это понятие включены лимфоциты, макрофаги, дендритные клетки и полиморфноядерные лейкоциты. IC оценивают как долю области опухоли, которую занимают иммунные клетки с окрашиванием PD-L1 любой интенсивности.

Суть

Иммуногистохимия (иначе ее называют иммуногистохимический анализ) представляет собой исследование, цель которого состоит в обнаружении патогенных клеток в тканевых образцах. Для этой цель используют молекулы, вырабатываемые иммунной системой.

Само название действия тройственное, в него уместились слова, которые сами по себе являются названиями определенных направлений в науке и практике:

• Иммунология;
• Гистология;
• Химия.

Реактивы, которые применяют, насыщены клетками (cellula), структура которых способна антигены к себе притягивать.

Для удобства, наглядности и контроля используют ферменты, начинающиеся проявляться при реакции положительной.

ИГХ – исследование дополнительное с точки зрения диагностики. К нему прибегают в случае отсутствия результатов гистологии, а также для уточнения на уровне молекул характеристик опухоли.

ИГХ имеет практическое применение при:

• Характеристике клеток;
• Анализе внутриклеточных процессов и уникальности синтеза, в клетках происходящего;
• Анализе гормонов и их рецепторов.

НМРЛ: методы определения экспрессии PD-L1

Экспрессия PD-L1 определяется методом иммуногистохимии. Оценка осуществляется путем подсчета соотношения опухолевых клеток с позитивным окрашиванием мембраны к общему количеству опухолевых клеток (TPS – tumor proportion score), результат выражается в процентах от 0 до 100.

В России зарегистрированы три диагностических набора для определения экспрессии PD-L1: производства Roche Diagnostics – PD-L1 sp142 и sp263, производства Dako – PD-L1 22C3. Тестирование проводится на платформах Ventana и Dako Autostainer Link 48 соответственно.

Экспрессия PD-L1 на опухолевых клетках

По уровню экспрессии PD-L1 выделяют следующие группы: отрицательная и позитивная экспрессия, в зависимости от количества окрашенных клеток.

Для тестирования может быть использован операционный или биопсийный материал первичной или метастатической опухоли, фиксированный в формалине и залитый в парафин. Обязательным требованием является наличие в исследуемом образце не менее 100 живых опухолевых клеток.

Определение уровня экспрессии PD-L1 и персонализированный подход к выбору терапии, основанный на результатах иммуногистохимического тестирования, позволяет сделать лечение пациентов с немелкоклеточным раком легкого более эффективным и безопасным в 1 линии терапии.

О программе определения экспрессии PD-L1

• Тестирование в рамках программы проводится на всей территории страны.
• Отправка материала и тестирование проводятся бесплатно для врачей, лечебных учреждений и пациентов.

Список литературы:

1. Zitvogel L, et al. Tumor Immunol. 2006; 6(10): 715-727. 2. Vesely MD, Schreiber RD. Ann NY Acad Sci. 2013; 1284(1): 1-5.
2. May KF Jr, et al. In: Prendergast GC et al. Cancer Immunotherapy. 2nd ed. Elsevier; 2013: 101-113.
3. Pardoll DM. Nat Rev Cancer. 2012; 12(4): 252-264. 2. McDermott DF, Atkins MB. Cancer Medicine. 2013; 2(5): 662-673.
4. Garon EB, et al. N Engl J Med. 2015; 372(21): 2018-2028.
5. Mino-Kenudson M. Programmed cell death ligand-1 (PD-L1) expression by immunohistochemistry: could it be predictive and/or prognostic in non-small cell lung cancer? Cancer Biol Med. 2016; 13: 157-170. doi: 10.20892/j.issn.2095-3941.2016.0009.
6. Dako Denmark A/S. PD-L1 IHC 22C3 pharmDx Interpretation Manual. 2. Dako Denmark A/S. Immunohistochemical Staining Methods. Sixth Edition, 2013.
7. Saleh K, Khalifeh-Saleh N, Kourie HR. Is it possible to rechallenge with PD-1/PD-L1 inhibitors after progression? Immunotherapy. Vol. 10(5), P.345-347.
8. Ghiotto M, Gauthier L, Serriari N, et al. PD-L1 and PD-L2 differ in their molecular mechanisms of interaction with PD-1. Int Immunol. Vol. 22(8), P.651-660.
9. Sharpe AH, Pauken KE. The diverse functions of the PD1 inhibitory pathway. Nat Rev Immunol. Vol. 18(3), P.153-167.
10. Ratcliffe MJ, et al. Clin Cancer Res. 2017; 23(14): 3585-3581.
11. von der Maase H, Sengelov L, Roberts JT, et al. Long-term survival results of a randomized trial comparing gemcitabine plus cisplatin, with methotrexate, vinblastine, doxorubicin, plus cisplatin in patients with bladder cancer. J Clin Oncol. Vol. 23(21), P.4602-4608.
12. Hirsch FR, Bunn PA. Lancet Oncol. 2009; 10(5): 432-433.
13. Kwak EL, et al. N Engl J Med. 2010; 363(18): 1693-1703.
14. Sonpavde G, Galsky MD, Latini D. Cisplatin-ineligible and chemotherapy-ineligible patients should be the focus of new drug development in patients with advanced bladder cancer. Clin Genitourin Cancer. Vol. 12(2), P.71.
15. Reck M, et al. N Engl J Med. 2016; 375(19): 1823-1833.
16. Garon EB, et al. N Engl J Med. 2015; 372(21): 2018-2028.
17. De Santis M, Bellmunt J, Mead G, et al. Randomized phase II/III trial assessing gemcitabine/carboplatin and methotrexate/carboplatin/vinblastine in patients with advanced urothelial cancer who are unfit for cisplatin-based chemotherapy: EORTC study 30986. J Clin Oncol. Vol. 30(2), P.191-199.
18. Hirsch FR, et al. J Thoracic Oncol. 2017; 12(2): 208-222.
19. Medical Systems Inc. VENTANA PD-L1 (SP142) Assay Interpretation Guide. pretation Guide. Реагент Ventana PD-L1 (SP142) IHC Assay для иммуногистохимической оценки лиганда-1 белка программируемой смерти в in vitro диагностике к иммуностейнерам автоматическим серии Ventana BenchMark №РЗН 2020 /9554 от 21.01.2020.
20. Melosky B, Blais N, Cheema P, at al. Standardizing biomarker testing for Canadian patients with advanced lung cancer. Curr Oncol. 2018 Feb; 25(1): 73-82.
21. Ratcliffe MJ, et al. Clin Cancer Res. 2017; 23(14): 3585–3581.
22. Ilie M, et al. PLoSONE. 2017; 12(8): 1.
23. Balar A.V., Dreicer R., Loriot Y. et al. Atezolizumab (atezo) in first-line cisplatin-ineligible or platinum-treated locally advanced or metastatic urothelial cancer (mUC): Long-term efficacy from phase 2 study IMvigor210. J Clin Oncol 36, 2018 (suppl; abstr 4523).
24. Herbst RS et al. Lancet. 2016;387(10027):1540–1550.

Войтив базу данных

Для того, чтобы отправить материал на диагностику, вы должны быть зарегистрированным пользователем. Если у вас уже есть логин и пароль, то повторная регистрация не требуется.

 
Регистрацияв программе

Если вы новый пользователь, пожалуйста, пройдите процедуру регистрации.

Перспективы

Перспективы, ИГХ, можно объединить в две группы:

• Обнаружение патологии;
• Лекарственная чувствительность.

Диагностические цели таковы:

• Окончательный вариант диагностического анализа;
• Уточнение степени раковой опухоли;
• Дифференцирование образований и процессов, с опухолями не связанными;
• Различение опухолевых процессов, присутствующих в организме.

Некоторые возможности с точки зрения препаратной чувствительности:

• Рецепторы стероидных гормонов;
• Белок Her2/neu;
• Рецепторы соматостатина 2А и 5 типов;
• PD-L1;
• Индекс пролиферативной активности (Ki-67);
• ALK, некоторые иные.

Описание

Иммуногистохимическое определение дифференцировки и гистогенеза опухоли — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Анализ выполняется для определения тканевого происхождения опухоли и степени дифференцировки. Чем выше степень дифференцировки, тем ниже уровень злокачественности.
ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования.Иммуногистохимическое исследование
Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс «антиген-антитело». Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркёром. Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов.Гистогенез опухоли
Гистогенез опухоли — это тканевое происхождение опухоли. Выявление гистогенеза позволяет определить морфологию опухоли и подобрать лечение. Ведь от происхождения опухоли зависит её чувствительность к процедурам химической или лучевой терапии.
Гистогенез опухоли устанавливается посредством изучения морфологии клеток и их сравнения с различными этапами онтогенетического развития клеток органа и ткани, в которых развилась данная опухоль.Степень дифференцировки
Степень дифференцировки показывает насколько опухолевая клетка отличается от нормальной по строению и функциям. Клетки опухоли подразделяют на:

• дифференцированные, когда строение опухоли максимально приближено к структуре ткани-предшественника;
• малодифференцированные, сходство которых с исходной тканью стёрто;
• недифференцированные (анаплазия) — клетки, утратившие какое-либо сходство с нормальными (исходными).

Чем ниже степень дифференцировки, тем выше уровень злокачественности опухоли.
Дифференцированные новообразования, как правило, относят к доброкачественным.
В рамках исследования используется панель из 5 антител. При необходимости подбираются дополнительные антитела.Показания к проведению ИГХ-исследования:

• определение типа опухоли, стадии развития, злокачественности и агрессивности;
• выявления первичного очага рака в стадии метастазирования.

Подготовка
Материалом для исследования являются парафиновый блок и предметные стёкла. В случае если материалом является образец ткани в растворе формалина, дополнительно должна быть выполнена услуга изготовления стёкол.
При проведении гистологического исследования в сторонней лаборатории необходимо обязательно предоставить протокол гистологического исследования.Интерпретация результатов
Ответ выдается в виде описания микропрепарата, применяемых красителей и заключения. Заключение может интерпретировать только врач, направивший на проведение исследования.

УРОТЕЛИАЛЬНЫЙ РАК: методы определения экспрессии PD-L1

Стандартом терапии 1 линии пациентов с раком уротелия продолжают быть химиотерапевтические режимы на основе цисплатина . Однако по данным литературы до 50% больных не подходят для назначения данной терапии . Ситуация с лечением изменилась с появлением иммунотерапевтических анти-PD-L1 препаратов . Сейчас для назначения иммунотерапии в первой линии распространенного уротелиального рака пациентам, которые не могут перенести ципсплатин, рекомендовано проведение PD-L1 диагностики. Для остальных групп пациентов диагностика PD-L1 не требуется (при невозможности проведения любой платиносодержащей химиотерапии и у пациентов с прогрессированием заболевания в ходе или после окончания любой платиносодержащей химиотерапии или в течение 12 месяцев после неоадъювантной или адъювантной химиотерапии).

Экспрессия PD-L1 определяется методом иммуногистохимии. Для этих целей используется диагностический набор Ventana PD-L1 (SP142) Assay (Ventana Medical Systems, Inc.). Для тестирования используется ткань опухоли, фиксированная в формалине и залитая в парафиновый блок. PD-L1 статус у пациентов с уротелиальной карциномой определяется как часть площади опухоли, занятая PD-L1 экспрессирующими иммунными клетками, инфильтрирующими опухоль, любой интенсивности окрашивания.

Рисунок 3. Окрашивание опухолевых и иммунокомпетентных клеток, инфильтрирующих опухоль, с помощью ИГХ-анализа VENTANA PD-L1 (SP142).

Рисунок 4. Окрашивание иммунокомпетентных клеток, инфильтрирующих опухоль, с помощью ИГХ-анализа VENTANA PD-L1 (SP142).

Определение уровня экспрессии PD-L1 иммуногистохимическим методом позволяет выделить группу пациентов для назначения анти-PD-L1 терапии.

Описание

Иммуногистохимическое исследование (1 антитело) — комплексное исследование биоптатов для идентификации специфичных антигенных свойств злокачественных опухолей, а также для определения вида и подвида онкозаболевания, его распространённости и первичного очага опухоли.
ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования.Иммуногистохимическое исследование  
Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс антиген-антитело. Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркёром. Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов,компонентов клеток и отдельных генов.
С помощью иммуногистохимического исследования возможно не только поставить точный диагноз — оно применяется также для определения возможности проведения специфической терапии и для определения степени злокачественности образования. Одной из целей иммуногистохимического исследования в случае метастазов из невыявленного первичного очага является выяснение источника метастазирования. Иммуногистохимическое исследование проводится:

Для определения гистогенеза опухоли, то есть определения конкретного вида опухоли, когда при рутинном гистологическом исследовании возникают сложности или сомнения в правильном диагнозе, а следовательно и в дальнейшей тактике лечения.
Для определения степени злокачественности опухолей, что также крайне важно для лечения пациента.
Для определения степени распространения опухолевого процесса в лимфатических узлах (при микрометастазах, когда при рутинном гистологическом исследовании опухолевой ткани еще может быть «не видно»).
Для разграничения в ряде случаев предраковых и раковых заболеваний.
Для определения таргетной терапии при ряде злокачественных опухолей (то есть лечение пациента может существенно изменяться при разной фенотипической картине одной и той же опухоли).

При каких заболеваниях мы проводим ммуногистохимическое исследование?

• Эпителиальные опухоли пищевода, желудка, кишечника, поджелудочной железы.
• Гастроинтестинальные опухоли.
• Нейроэндокринные опухоли различных локализаций.
• Мягкотканные опухоли различных локализаций.
• Широкий спектр лимфопролиферативных заболеваний.
• Опухоли женских половых органов (яичники, маточные трубы, шейка и тело матки).
• Опухоли кожи.
• Меланомы.
• Опухоли печени.
• Опухолеподобные заболевания и опухоли предстательной железы.
• Опухоли почек.
• Опухоли лёгких.
• Опухоли мочевого пузыря.
• Определение гистогенеза опухоли при неустановленном первичном источнике.

Подготовка
Определяет лечащий врач.Интерпретация результатов
В заключении врач отмечает, к каким антителам определена сродство ткани. Дополнительно описывается морфологическая структура образца — какие клетки и в каком количестве присутствуют.
Выявление сродства ткани к определённым стандартным опухолевым антителам свидетельствует о конкретном виде онкологического заболевания.

Расшифровка результатов

По результатам гистологического исследования оцениваются размеры взятого материала, его цвет, свойства и концентрация, а также патологические изменения в тканях, их атипичного роста и так далее.

Недостаточное количество биоматериала или отсутствие в нем патологии может дать ложноположительный результат, поэтому необходимо соблюдать правила забора исследуемого образца.

Изучение результатов гистологии входит в обязанности патологоанатома или патоморфолога. Они изучают историю болезни пациента и на основе клинических данных составляют заключение. В случае однозначных итогов лабораторных тестов, специалисты ставят окончательный диагноз. Спорные случаи врачи обсуждают на консилиуме.

Диагноз устанавливается согласно нормам ВОЗ или министерства здравоохранения страны.

Длительность гистологического исследования обычно длится от 1 недели, если образец был взят из мягких тканей и около 2 недель, если это образец костных тканей.

Транспортировка биоматериала сопровождается записью в специальном журнале и производится в тщательно упакованной таре ответственным лицом для передачи лаборанту.

• Инфекционные исследования
• Общеклинические исследования

Как получают материал для гистологического исследования?

Образец ткани получают с помощью процедуры, которая называется биопсией. Она бывает разных видов:

• Эксцизионная — патологическое образование удаляют полностью. Такие операции одновременно являются и лечебными, и диагностическими.
• Инцизионная — удаляют часть патологического образования.
• Эндоскопическая — материал для исследования получают во время эндоскопических исследований полых органов, например, желудка, кишечника, мочевого пузыря, матки.
• Бритвенная — врач сбривает с помощью острого лезвия новообразование, возвышающееся над поверхностью кожи.
• Толстоигольная (трепан-биопсия) — получение столбика ткани с помощью трепана, специального инструмента в виде трубки с заостренным краем.
• Тонкоигольная аспирационная — с помощью иглы, соединенной со шприцем.
• Пайпель-биопсия — сбор образцов ткани из полости матки с помощью трубочки с боковым отверстием на конце, внутри которой находится поршень для создания отрицательного давления.
• Диагностическое выскабливание тела и шейки матки.
• Тонкоигольная эндоскопическая биопсия под контролем эндоУЗИ — получение материала с помощью иглы, введенной через стенку органа во время эндоскопического исследования.
• Мазки, отпечатки, соскобы.

Не все эти процедуры позволяют получить ткань органов с сохраненной структурой. Иногда для диагностики достаточно отдельных клеток — их изучение называется цитологическим исследованием. Врач выбирает подходящий вид биопсии, в зависимости от характера заболевания, размеров, локализации патологического образования и других факторов.

Описание

Иммуногистохимическое исследование (2 антитела p16+ p53) — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) используется в диагностике различных патологических состояний, диагностике и дифференцировки опухолей, а также для прогноза течения заболевания и оценки эффективности лечения.ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования.Иммуногистохимическое исследование  
Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, присутствуют определенные  антигены. При нанесении на образец ткани специфических антител, образуется комплекс «антиген-антитело» и происходит окрашивание ткани. В результате ИГХ-исследования выдается заключение о наличии или отсутствии экспрессии патологических белков (антигенов) в ткани, что помогает лечащему врачу поставить клинический диагноз и спрогнозировать эффективность лечения.
Диффузная экспрессия экспрессия p16 свидетельствует о прогрессировании заболевания. Отсутствие или очаговая экспрессия p16 может служить дополнительным признаком благоприятного течения патологического процесса в тканях. 
Одним из основных регуляторов клеточного цикла является супрессорный белок р53. Гиперэкспрессия белка р53 обычно ассоциируется с высоким риском развития местных рецидивов (распространение за пределы капсулы опухоли и/или метастазы в регионарные лимфоузлы) онкологического процесса. Показания к проведению ИГХ-исследования
Необходимость проведения иммуногистохимического исследования опухоли определяется лечащим врачом.Подготовка
Материалом для исследования являются парафиновый блок и гистологические стёкла. Для ИГХ-исследования обязательно предоставляется протокол гистологического исследования.
В случае если материалом является образец ткани в растворе формалина, то предварительно проводится гистологическое исследование ткани (вид гистологического исследования определяется лечащим врачом).Интерпретация результатов
Ответ выдается в виде описания микропрепарата, применяемых красителей и заключения. Заключение может интерпретировать только врач, направивший на проведение исследования.