(812) 325-77-88

Иммуноферментный анализ

В этих видах серологического исследования применяются уникальные стабильные реагенты. Отмеченные вещества как бы приклеиваются к искомым антителам. В итоге мы получаем качественный или количественный результат.

Если выраженных маркеров не обнаружилось, то результат будет считаться отрицательным. Если присутствие антител в биологических образцах при качественном исследовании обнаружено, то результат анализа считается положительным. При количественном определении клеток анализ дает более точный результат.

Анализируя показатели анализа (например, сумму выявленных клеток) специалист определяет, находится ли заболевание на начальном этапе, в острой стадии, или это обострилась хроническая форма патологии. Для того чтобы поставить диагноз, врач учитывает не только данные серологического исследования, но и клиническую картину заболевания.

Что такое серологическое исследование крови?

Объект серологии — антигены и антитела

Серологическое исследование (СИ) основано на способности антигенов и антител связываться друг с другом. СИ позволяет с точностью выявить наличие у пациента определённого вируса либо бактерии, группу крови и резус, реактивность организма к антибиотикам, аутоиммунные заболевания, гормональные нарушения, индивидуальную специфичность белков, определить эффективность терапии.

Система иммунитета борется с проникающими в организм болезнетворными микробами (антигенами) при помощи антител, при этом создавая к каждому из вирусов, паразитов либо бактерий свой определённый тип защиты.

Антиген и антитело подходят друг другу как замочная скважина и ключ, при встрече они непременно связываются. Эта серологическая реакция позволяет выявлять различные виды антител либо антигенов.

Способность иммунитета вырабатывать особые вещества, нейтрализующие вредоносные частицы, была известна учёным давно. Но увидеть реакцию антиген-антитело в лабораторных условиях удалось только в конце XIX века. Было обнаружено, что в результате образования связки, комплексы выпадают в осадок, образуя хлопья либо помутнение. Такие реакции получили названия агглютинации и преципитации. В XX веке серология — наука о свойствах сыворотки, стремительно развивалась, обнаруживались новые методы диагностирования на основе реакций антиген-антитело. На сегодняшний день существует множество способов выявления иммунных комплексов, а СИ являются незаменимым звеном в диагностике, лечении, создании новых медицинских препаратов и вакцин.

Микробиологические исследования

Целью микробиологического исследования является выделение возбудителя данного заболевания из инфицированных участков, поэтому необходимо взять мазок у пациента (у мужчин чаще всего из уретры, у женщин — из уретры или шейки матки). Собранный материал вносится в специальные среды, на которых в соответствующих условиях растут любые патогенные микроорганизмы (инкубация занимает около 2 суток).

Микробиологические исследования венерических заболеваний

По истечении этого времени проверяют состояние среды — если она зарастает, выявляют на ней микроорганизмы. После идентификации данной бактерии / грибка также проверяется их лекарственная устойчивость, чтобы можно было провести соответствующее лечение. 

Вирусы, с другой стороны, не должны размножаться в клеточных культурах, потому что они растут только в живых клетках (например, для этого используются оплодотворенные куриные яйца) – обнаружение вирусов таким способом — сложный и дорогостоящий процесс, поэтому обычно используются другие методы.

Подготовка

Стоит сразу правильно подготовиться к исследованию, чтобы сразу получить максимально точные результаты. А что может спровоцировать недостоверные данные анализов:

• употребление за сутки кофе, алкоголя любой крепости, продуктов с высоким содержанием жиров и простых углеводов;
• длительное пребывание под открытыми лучами солнца;
• прием препаратов с противомикробными, противовирусными или антибактериальными свойствами;
• чрезмерная двигательная активность, тяжелые физические нагрузки в течение суток перед анализом;
• забор биологического материала у пациентов, которые только недавно завершила химио- или антибиотикотерапию.

Сдавать серологический анализ крови из локтевой вены обычно нужно в утренние часы. Если пациент по медицинским показаниям не должен пропускать прием пищи, то анализ проводится через пять часов. Необходимо не курить хотя бы за 30 минут до сдачи крови и согласовать прием или отмену лекарственных препаратов с лечащим врачом. Исследование не может быть проведено при плохом самочувствии пациента — слабости, повышенной температуре тела, в том числе из-за протекающей в организме инфекции, обострении любой хронической патологии.

Кресты, прочерки и плюсы в расшифровке анализа: как понимать

Результаты некоторых серологических тестов могут выдаваться в виде таблицы, где в колонках указываются кресты или прочерки. Как происходит расшифровка такого результата?
Так, например, МР или реакция микропреципитации рассчитывается в цифровом эквиваленте, показывая количественный титр инфекции.

RW (реакция Вассермана) подразумевает получение показателей теста в виде:

• прочерка (отрицательный тест);
• одного или двух крестов (слабоположительный);
• трёх крестов (положительный);
• четырёх крестов (резко положительный тест).

Лучшие материалы месяца

• Коронавирусы: SARS-CoV-2 (COVID-19)
• Антибиотики для профилактики и лечения COVID-19: на сколько эффективны
• Самые распространенные «офисные» болезни
• Убивает ли водка коронавирус
• Как остаться живым на наших дорогах?

Наличие даже одного креста в результатах – основание для назначения следующих анализов уточняющего характера. Прочерк в таблице не гарантирует абсолютно точного отсутствия болезни.

Результаты РИФ также обозначаются в виде плюсиков или крестов – от одного до четырёх. Если у человека показан прочерк (минус) – значит, сифилис отсутствует. Результаты в виде одного, двух, 3 крестов или 4 “плюсиков” говорят о наличии болезни.

РПГА не даёт никаких количественных ассоциаций в результате – он показывает либо полное отсутствие болезни, или её присутствие в прошлом или настоящем.

Результаты ИФА расшифровать более сложно. Они представлены в виде таблицы классов антител IgA, IgM и IgG. Возле каждого значения стоит прочерк либо крест. Сопоставляя наличие или отсутствие конкретного типа антител, лечащий врач может сделать вывод о стадии болезни, давности заражения.

После проведения комплексного обследования на сифилис, доктор сводит все полученные результаты в единую расширенную таблицу, пользуясь методикой плюсов и минусов. Проставляя кресты и прочерки в зависимости от того, был ли результат конкретного анализа положительным или отрицательным, лечащий врач может составить картину заболевания.

Особенности данного теста

Проведение данного анализа не всегда способно дать 100%-ную уверенность в том, что определенное заболевание обнаружено. Бывает так, что результаты могут быть неоднозначными и требуется проведение других процедур.

Например, во время исследования на бруцеллез сыворотка крови проходит контроль на самозадержку без антигена. Это существенно повышает достоверность тестирования. Анализ на бруцеллез может иметь положительное или отрицательное значение, а также вызывать сомнения.

При получении сомнительных результатов, не имеющих однозначной трактовки, рекомендовано сдать анализ повторно. Кроме того, бруцеллез можно выявить в результате посевов крови, исследовав костный мозг и спинно-мозговую жидкость.

Сравнительная характеристика и использование методов серологических исследований в медицинской практике

Методы С. и. непрерывно совершенствуются в направлении повышения чувствительности и универсальности использования. Изначально серол. диагностика основывалась на выявлении антител. С появлением в середине 20 в. реакций иммунофлюоресценции и пассивной гемагглютинации, обладающих большей чувствительностью, появилась возможность обнаруживать не только антитела, но и антиген непосредственно в материале от больных. Энзим-иммунологический и радиоиммунологический методы, по чувствительности на 2—3 порядка превышающие иммунофлюоресценцию и пассивную гемагглютинацию, приближаются к методам биол. обнаружения бактерий и вирусов. Область их применения для обнаружения как антигенов, так и антител теоретически не ограничена.

Серодиагностика инф. болезней базируется на появлении антител к выделенному или предполагаемому возбудителю независимо от того, был ли обнаружен возбудитель в острой стадии болезни. Исследуют пары сывороток крови, взятых в начале болезни и 2—3 нед. спустя. Прирост антител во второй сыворотке крови не менее чем в 4 раза по сравнению с первой является диагностически значимым. Имеет также значение, каким классом иммуноглобулинов представлены антитела. IgM-антитела обнаруживают в конце острого периода болезни и в ранней стадии реконвалесценции. IgG-антитела появляются в более поздние сроки реконвалесценции и циркулируют долго. Если у женщины в первом триместре беременности обнаруживают IgM-антитела к вирусу краснухи, то это служит основанием для прерывания беременности, т. к. в этот период плод особенно чувствителен к вирусу. При разных инф. болезнях избирательно используют наиболее специфические и удобные в исполнении методы.

Серологические исследования широко применяют в эпидемиологии. Систематический сбор и исследование образцов крови различных групп населения позволяют уяснить контакты населения с источником возбудителей инф. болезней. Изучение уровня коллективного иммунитета позволяет выявлять группы повышенного риска и планировать прививочные мероприятия, изучать географическое распространение инфекций. С. и. различных возрастных групп населения позволили, напр., ретроспективно выявить циркуляцию разных вариантов вируса гриппа в определенные периоды времени.

Серологические исследования имеют большое значение в изучении наследственных болезней (см.) и аутоиммунных болезней, сопровождающихся появлением ткане- и органоспецифических антител, разрушающих соответствующие клетки-мишени, а также в онкологии для обнаружения опухолевых антигенов. Так, иммунодиагностика рака печени основана на определении в сыворотке крови больных альфа-фетопротеина и других эмбриональных антигенов методом иммунодиффузии и радиоиммунологическим методом.

Значительный прогресс науки в изучении тонкой антигенной структуры клеточных антигенов, антигенов бактерий и вирусов достигается благодаря применению в серол. реакциях моноклональных антител, к-рые можно получать к отдельным детерминантам антигена.

См. также иммунодиагностика.

Библиография: Методы исследований в иммунологии, под ред. И. Лефковитса и Б. Перниса, пер. с англ., М., 1981; Руководство по иммунологии, под ред. О. Е. Вязова и Ш. X. Ходжаева, М., 1973; Руководство по клинической лабораторной диагностике, под ред. В. В. Меньшикова, М., 1982; Immunology, ed. by J.-F. Bach, N. Y., 1978.

Виды иммуноглобулинов в исследовании

При внедрении  любого возбудителя болезни в организм, включая паразитов, аллергены в ответ вырабатываются защитные белки – иммуноглобулины. Их виды различны по специфическим функциям, способности связываться с определенными антигенами, скорости реакции на проникновение патогенной флоры, прочности связи с болезнетворным агентом. Виды иммуноглобулинов:

1. G – имеют противовирусную, антибактериальную активность. Появляются в крови, при длительном нахождении возбудителя в организме или его повторном проникновении. Присутствуют в сосудистом русле и за его пределами.
2. М – первые синтезируются, если возбудитель попал в кровь. Запускает каскад защитных реакций, чтобы привлечь другие иммуноглобулины, лимфоцитарные клетки.
3. А – имеют 2 вида: сывороточные, секреторные. Первые содержатся в крови, вторые в слюне, слезе, грудном молоке, пищеварительном, дыхательном тракте. Препятствуют проникновению болезнетворной флоры в организм, ликвидируя их в полости рта, носа, пищеварительном тракте, бронхах.
4. Е – участники иммунного ответа при проникновении в организм паразитов (гельминтов). Главные иммуноглобулины, которые отражают аллергические реакции немедленного типа.
5. D – малоизученная группа иммуноглобулинов, появляются в крови при хронических воспалениях.

Во время серодиагностики инфекционных заболеваний наибольшее значение имеет уровень иммуноглобулинов М, А, G.

Что такое серологический анализ крови

Серология — одна из отраслей иммунологии, которая изучает особенности взаимодействия антигенов и антител, а также иммунологических характеристик плазмы. Выполнение исследования позволяет выяснить, что спровоцировало развитие той или иной инфекционной патологии. Это ведущая диагностическая методика ВИЧ, различных гепатитов, заболеваний, передающихся половым путем. Проведение серологического исследования помогает подтвердить или опровергнуть инфекционную природу патологии, установить видовую принадлежность возбудителя и его чувствительность к фармакологическим препаратам.

Антигены и антитела. Серологические реакции между антигенами и антителами.

Антигены – генетически чужеродные вещества, которые при введении в организм животного или человека вызывают специфический иммунный ответ — синтез антител, формирование сенсибилизированных Т-лимфоцитов, иммунологической  памяти или толерантности. Под чужеродными веществами понимаются химические структуры, которых нет в организме. Инородными для организма человека являются вирусы, микроорганизмы, а также клетки, ткани, органы животных и других людей. Антигены имеют несколько рецепторов для связи с антителами и способны вступать в реакцию с ними как в организме животного или человека (in vivo), так и вне организма – в пробирке (in vitro).

Антитела — высокомолекулярные белки глобулиновой фракции сыворотки крови. Антитела синтезируются под влиянием антигена и способны специфично реагировать (соединяться) с соответствующим антигеном. Все антитела имеют характерную структуру иммуноглобулинов; отличаются по иммунологическим, биологическим и физическим свойствам; и делятся на 5 классов – ІgG , ІgА, ІgМ, ІgD и ІgЕ. 

Серологический анализ: расшифровка

Серологическое исследование крови — анализ, который позволяет определить/подтвердить тип возбудителя инфекции, помогает специалисту поставить диагноз. Это незаменимая помощь, если врач не может подобрать лекарственную терапию, так как возбудители различных заболеваний отличаются разной чувствительностью к действию конкретных лекарств и антибиотиков.

После того, как процедура сбора материала закончена, лаборанты приступают к следующему этапу — расшифровывают показатели. Так, если в крови у пациента антитела не обнаружены, можно делать вывод, что в организме нет инфекций — результат анализа в таком случае положительный.

Но такое положение вещей, скорее, исключение из правил: если есть симптомы заболевания, серологические исследования выявляют и доказывают наличие серьезной патологии в организме.

Сначала в организме с помощью анализа находят возбудителей заболеваний, далее оценивают количество антител, на основании чего делают вывод о том, насколько серьезно развита инфекция.

Показания к проведению серологического анализа

Серологические анализы крови назначают для диагностики различных инфекций:

• вирусные — корь, ЦМВ, гепатит В и С и другие;
• бактериальные — например, боррелиоз или брюшной тиф;
• паразитарные — например, токсоплазмоз или токсокароз.

Чаще всего серология применяется для выявления вирусных инфекций, потому что выделить вирусы из организма напрямую очень сложно. Прямые методы используются только в вирусологии с научными целями, а для бытовой диагностики не применяются.

При менингитах используют серологический анализ ликвора, спинномозговой жидкости. Если менингит вызван бактериями или вирусами, в ликворе появятся антитела к этим возбудителям.

Комплексы серологических реакций показаны не только при наличии явных клинических признаков болезни. Обследование применяют для выявления носителей различных инфекций. Например, при трудоустройстве нужно сдавать:

• серологическое исследование крови на брюшной тиф;
• тесты для определения маркеров вирусных гепатитов;
• анализ крови на сифилис.

Эти обследования показаны не для всех профессий, а для так называемых декретированных групп. Сюда входят медицинские работники, педагоги, работники торговли и пищевой промышленности.

Серологические тесты используют для оценки напряженности иммунитета к различным инфекциям у переболевших или привитых людей. Если уровень антител после вакцинации снижается менее определенного значения, прививку нужно повторять.

Расшифровка

Расшифровкой серологических анализов занимается врач из лаборатории. Каждый класс иммуноглобулинов вырабатывается на определенном этапе развитии патологии, поэтому удается с высокой точностью установить ее стадию:

• высокое содержание иммуноглобулинов A указывает, что с момента инфицирования прошло несколько месяцев;
• повышенный уровень иммуноглобулинов M свидетельствует о длительном течении заболевания или его обострении на фоне резкого снижения иммунитета;
• увеличение уровня иммуноглобулинов G наблюдается, если человек заражен или у него выработался иммунитет к патогенам. При вторичном инфицировании они будут незамедлительно уничтожены.

Результаты могут быть ложноотрицательными или ложноположительными из-за длительной антибиотикотерапии, наличия аутоиммунных заболеваний, включая ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилоартрит, системную красную волчанку. А также при тяжелых патологиях печени, органов мочевыделения, любой формы туберкулеза. Ложноположительные результаты нередко спровоцированы беременностью вследствие изменения гормонального фона, недавней вакцинацией из-за присутствия в крови антител к введенным патогенам.

Серологическое исследование и расшифровка результатов редко длятся более суток. Современные лаборатории оснащены всем необходимым оборудованием для осаждения кровяных телец, отделения фракций, выполнения качественных и количественных биохимических реакций. Скорость выполнения анализа зависит от метода его проведения.

Расшифровка результатов: ложные, ошибочные, ложноположительные, ложноотрицательные

Почему при появлении первых же признаков и симптомов сифилиса следует сразу обратиться к доктору? Дело в том, что даже если самостоятельно сдать анализы в ближайшей лаборатории, правильно расшифровать их показатели может только квалифицированный венеролог.

Любые типы серологических тестов назначаются обычно как экспресс-диагностика, или при прохождении медосмотров. Их результаты могут быть отрицательными, слабоположительными, если концентрация антител не достигает определённого уровня, или положительными. Кроме того, каждый тип анализа может быть ложноположительным или ложноотрицательным. Положительные реакции нетрепонемных тестов обычно проверяются результатами специфических трепонемных.

Трепонемные серологические обследования также могут быть отрицательными, сомнительными, слабоположительными или положительными. Например, иммуноблоттинг назначается с целью подтвердить или опровергнуть результаты первичного обследования. Выявление антител типа IgG и IgM в крови отмечается полосками.

Если и неспецифический первичный скрининг, и специфическая серологическая реакция показывает отрицательный результат, значит, человек здоров, либо заражение произошло менее 10 дней назад.

Положительная реакция у беременных также может присутствовать при нетрепонемном скрининге, однако если далее был проведён иммуноблоттинг-тест, и он дал отрицательный результат, это означает отсутствие заболевания.

Может ли ошибка закрасться в результаты теста? Всегда существует некоторая вероятность, что анализ показал ошибочные результаты

Поэтому в процессе диагностирования доктор должен обращать внимание и на внешние факторы, которые не зависят от пациента

Ложноположительные тесты могут появляться, если у человека присутствует:

• сахарный диабет;
• алкогольное или наркотическое опьянение;
• корь, мононуклеоз, гепатит;
• болезни сердца;
• опухоль любого типа;
• беременность;
• аутоиммунное заболевание.

Большинство типов тестов могут выявить присутствие болезни, но только если она достигла определённой стадии развития. Например, RW покажет наличие заражения со 100-процентной вероятностью, но только спустя месяц после попадания возбудителя в организм. Третичный сифилис отображается в результатах RW с вероятностью до 75%.

Ранние стадии более целесообразно диагностировать посредством осуществления ИФА-тестов. Если у человека отсутствуют другие заболевания, его достоверность стремится к 96%.

Отрицательный показатель может свидетельствовать об отсутствии заболевания. Сомнительный результат – причина для назначения повторного обследования. Если у пациента обнаружены антитела к сифилису, это не повод для паники – квалифицированное и вовремя подобранное лечение может справиться с болезнью, если она присутствует, без каких-либо опасных последствий.

Методы проведения серологического исследования.

В серологии может применяться большое число методов

Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.

Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).

Непрямая гемагглютинация — один из методов диагностики

Методы серологических исследований:

• Агглютинация. Связывание Ат с Аг с последующим формированием хлопьев либо осадка. Применяются прямые, непрямые, развёрнутые, ориентировочные реакции, позволяющие выявить антитела в сыворотке.
• Гемагглютинация. Используются эритроциты с адсорбированными на них Аг либо Ат, которые склеиваются с соответствующими Ат и Аг. Образуемые комплексы выпадают в виде фестонного осадка.
• Преципитация. Образование комплекса Аг-Ат с последующим осаждением в виде помутнения, именуемого преципитатом.
• Коагглютинация. Выявление Аг при помощи Ат, адсорбированных на белке клеток стафилококка.
• Торможение гемагглютинации. Ат иммунной сыворотки подавляют вирусные Аг, в итоге вирусы теряют способность склеиваться с эритроцитами.
• Непрямая реакция Кумбса. Определяются Ат к поверхностным Аг эритроцитов.
• Кольцепреципитация. Проводится на основе иммунной сыворотки с наслоением растворимого Аг.
• Двойная радиальная иммунодиффузия. Реакция основана на диффундировании компонентов антисыворотки и Аг в лунках агара либо агарозы.
• Реакция связывания комплемента. Связь Аг и Ат сопровождается адсорбцией комплемента, в качестве индикатора используются эритроциты барана и Ат к ним в составе гемолитической сыворотки.
• Нейтрализация. Основана на нейтрализации вирусного агента антителами.
• Реакции, основанные на маркировании Ат и Аг флуоресцентным либо ферментным составом — иммунофлюорисцентный (РИФ) и иммуноферментный (ИФА) методы.

Минусы серологического анализа

Серологические методы не могут быть единственными способами диагностики инфекционных болезней. Серология дает небольшой процент ложноположительных и ложноотрицательных реакций.

Однократного серологического анализа крови недостаточно, поскольку выявленные антитела могут быть следствием ранее перенесенной инфекции или поствакцинального иммунитета. Чтобы убедиться в наличии болезни, нужно сдавать парные сыворотки с интервалом 8-10 дней. Если во второй сыворотке антител будет больше, значит, болезнь прогрессирует.

Существует понятие серологического окна. Чтобы в ответ на попадание микробов выработались антитела, организму нужно время. Для разных инфекций оно составляет от 2 дней до 2 недель. Этот период и является окном — анализ не показывает наличие антител, но человек уже инфицирован. Период окна характерен для ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов.