Криопротокол по омс в 2021 году

Обследования перед ЭКО

Перед проведением экстракорпорального оплодотворения обоим родителям назначается комплекс диагностических процедур, целью которых является:

• Определение причины бесплодия у одного или обоих родителей;
• Выявление возможных заболеваний, способных негативно сказаться на эффективности ЭКО или нанести ущерб матери и ее будущему ребенку;
• Оценка вероятности наступления беременности естественным образом и при экстракорпоральном оплодотворении;
• Оценка совместимости генетического материала обоих родителей для исключения резус-конфликта;
• Выбор наиболее эффективного протокола ЭКО, дополнительных репродуктивных технологий для повышения шанса наступления беременности.

Стандартный комплекс диагностики для женщин перед ЭКО включает следующие процедуры:

Анализы крови – клинический, биохимический (на белок, холестерин, мочевину, креатинин и т. д.), гормональный (АМГ, ФСГ, ЛГ и другие), на инфекции (ВИЧ, гепатиты В и С, сифилис, TORCH-комплекс), на резус-фактор и группу крови;

Мазки из цервикального канала и влагалища – микроскопическое исследование, посев на мико- и уреплазму, цитологическое исследование соскоба с шейки матки, исследование на ДНК хламидии, цитомегаловируса, герпесвируса;

Функциональные обследования – флюорография, электрокардиограмма, ультразвуковое исследование щитовидной и паращитовидной желез, органов малого таза, груди, маммография (для женщин старше 35 лет).

Будущий отец также должен пройти стандартный цикл диагностических обследований, включающий:

• Анализы крови – на группу крови и резус-фактор, госпитальный комплекс инфекций (ВИЧ, сифилис, гепатиты В и С);
• Спермограмму – исследование спермы на выявление количества и качества сперматозоидов, их морфологического строения, подвижности и т. д.;
• MAP-тест – исследование спермы на содержание антиспермальных антител, являющихся признаком аутоиммунного бесплодия у мужчин;
• Мазки из уретрального канала – на определение ДНК хламидии, цитомегаловируса, герпесвирусов, для микроскопического исследования отделяемого уретры, посев на мико- и уреплазму.

По результатам обследований врач (гинеколог или андролог) составляет заключение, в котором определяет причину бесплодия, наличие возможных заболеваний у родителей, шанс на успешное наступление беременности. При необходимости он может назначить прохождение дополнительных диагностических процедур для уточнения диагноза.

История криоконсервации

О сохранении биологического материала с помощью низкой температуры человек задумывался давно. Тем более, что на такую мысль наталкивает сама природа – всем известны лягушки, впадающие в ледяной анабиоз зимой и успешно оживающие после оттаивания. Учеными неоднократно делались попытки замораживания отдельных органов и даже целых живых организмов (лабораторных мышей), однако из-за несовершенства технологии результаты этих опытов были не слишком успешными.

Куда больших результатов удалось достичь в криоконсервации клеток и тканей. Уже в 1954 году было успешно проведено первое искусственное оплодотворение с использованием замороженной спермы. Однако, на тот момент использовалась несовершенная технология постепенного замораживания, из-за чего в некоторых клетках образовывались кристаллы льда, и часть из них разрушалась.

Лишь в 1983 году было проведено первое искусственное оплодотворение с использованием криоконсервированных яйцеклеток, а затем и эмбрионов. Постепенно с развитием технологий замораживания, эта процедура стала штатно использоваться для хранения генетического материала в донорских банках и центрах репродуктологии.

Как происходит зачатие

Происходит проникновение сперматозоида через лучистую корону яйцеклетки, слой фолликулярных клеток на внешней стороне вторичного ооцита. Оплодотворение происходит во время слияние ядра сперматозоида и ядра яйцеклетки, после чего образуется диплоидная клетка — зигота. Удачное слияние гамет влечет создание нового организма.

В месте проникновения сперматозоида ооплазма вытягивается в конической форме, называемой конусом приема или конусом притяжения. После прохождения одного сперматозоида периферийная часть ядра яйцеклетки изменяется в мембрану, предотвращая проникновение туда других сперматозоидов.

В начале процесса оплодотворения сперма претерпевает ряд изменений. Первоначально сперматозоиды плохо подготовлены для оплодотворения. Сперматозоиды должны пройти так называемую капацитацию в репродуктивном тракте женщины в течении нескольких часов, что должно повысить его моторику и дестабилизировать мембрану, подготовив его к акросомной реакции, ферментативному проникновению через плотную мембрану яйцеклетки, зоны пеллюцида, окружающих яйцеклетку.

После прохождения лучистой короны, сперматозоид достигает зоны пеллюцида, являющейся внеклеточной матрицей гликопротеинов. Специальная молекула на головке сперматозоида связывается с гликопротеином ZP3 в зоне пеллюцида. Это соединение заставляет акросому лопнуть, высвобождая ферменты, которые помогают сперматозоиду пройти через зону пеллюцида.

Во время оплодотворения яйцеклетка также проявляет определенную активность. После того, как сперматозоиды находят свой путь через зону пеллюцида происходит кортикальная реакция. Происходит сливание кортикальных гранул внутри вторичного ооцита с плазматической мембраной клетки, в результате чего ферменты, находящиеся внутри этих гранул изгоняются экзоцитозом в зоны пеллюцида. Это в свою очередь приводит к тому, что гликопротеины в зоне пеллюцида соединяются друг с другом, ферменты вызывают гидролиз ZP2 в ZP2f, что делает всю матрицу трудно проницаемой для сперматозоидов. Данный процесс предотвращает оплодотворение яйцеклетки более чем одним сперматозоидом. Кортикальная и акросомная реакции необходимы, чтобы яйцеклетка была оплодотворена только одним сперматозоидом.

Далее сперматозоид проникает в цитоплазму яйцеклетки, также называемой овоцитом. При это кортикальная реакция предотвращает попадание других сперматозоидов в эту зону. На данном этапе овоцит претерпевает свое второе мейозное деление, производя гаплоиды яйцеклетки и выпуская полярное тельце. В этот момент ядро сперматозоида сливается с ядром яйцеклетки, происходит объединение их генетических материалов.

В ходе подготовки к слиянию генетического материала сперматозоида и яйцеклетки происходит его преобразование. Ооциты завершают свое второе мейозное деление, что приводит к зрелой яйцеклетки. На данном этапе ядро ооцита называется протоядром. Хвост и митохондрии сперматозоида вырождаются с образованием мужского протоядра. Именно поэтому все митохондрии в организме человека женского происхождения. Но, несмотря на это значительное количество РНК сперматозоида доставляется к эмбриону и вероятно оказывает определенное влияние на развитие плода, а также на фенотип потомства.

Протоядро мигрирует по направлению к центру ооцита, быстро реплицируя его ДНК, для того, чтобы подготовить зиготу для своего первого митотического деления.

Мужское и женское протоядра не сливаются, несмотря на то, что их генетические материалы объединяются. Вместо этого происходит растворение их мембран, ликвидируя барьеры между мужскими и женскими хромосомами. В ходе этого растворения между ними формируется митотический шпиндель. Шпиндель производи захват хромосом прежде, чем они растворятся в цитоплазме яйцеклетки. В дальнейшем происходит митоз, включающий в себя вытягивание от хроматид к центриолям в анафазе, клетка собирает мужской и женский генетический материал. Как видно первый митоз объединения яйцеклетки и сперматозоида фактически заключается в соединении их хромосом

Каждая из двух образовавшихся в ходе этого митоза дочерних клеток имеет одну копию каждого хроматида, образовавшегося на предыдущем этапе. Они являются генетически одинаковыми.

Оплодотворение является нулевой точкой отсчета начала развития плода и определяет момент от которого отсчитывается срок беременности.

Как улучшить эндометрий перед ЭКО

Если у пациентки не диагностированы патологии слизистой матки, ее подготовка к экстракорпоральному оплодотворению включает только прием гормональных препаратов и вспомогательных веществ. Терапия проводится в несколько этапов:

• Препараты эстрадиола. Этот стероидный гормон (эстроген) вырабатывается фолликулярным аппаратом яичников. Он улучшает маточное кровообращение, увеличивает толщину эндометрия, нормализует менструальный цикл женщины, стимулирует синтез других женских половых гормонов.
• Препараты прогестерона. Назначение этого стероидного гормона – перевод эндометрия в «секреторную» стадию, уменьшение иммунного ответа матери на эмбрион (являющийся наполовину чужеродным организмом), замедляет деление эндометриальных клеток. Прогестеронновая терапия проводится как перед ЭКО, так и после, для лучшего закрепления плодного яйца в матке.

Помимо гормональной терапии, в рамках подготовки к ЭКО пациентке назначается прием витаминно-минеральных комплексов, содержащих витамины группы В, витамины А, Е, С, цинк, железо, магнием и другими нужными элементами. Для коррекции состояния эндометрия врач также прописывает препараты, улучшающие кровоснабжение матки. 

Развитие эмбриона после пересадки

Перенос эмбриона осуществляется, как правило, на 5-6 день – при достижении им стадии бластоцисты. В этот период он наиболее приспособлен к имплантации, что повышает шансы на успешное наступление беременности. После трансфера эмбрион проходит следующее развитие:

• В 1 день зародыш выходит из бластоцисты, его клетки разделяются на внутренние (трофобласт), из которых формируется плацента, и наружные, что станут основой для развития органов;
• На 2 сутки эмбрион начинает вживляться в эндометрий матки и закрепляться в нем, при этом слизистая также претерпевает изменения – в частности, увеличивается концентрация кровеносных сосудов, изменяется структура тканей;
• В течение 3-5 дней ворсинки трофобласта погружаются в эндометрий, откуда эмбрион получает питательные вещества, кислород, а также куда выводит продукты своей жизнедеятельности;
• На 6-й день после трансфера эмбрион выделяет фермент, растворяющий эндометрий для еще большего углубления в него, при этом пространство между ворсинами трофобласта заполняется кровью, которая может (но не обязательно) выделяться у пациентки;
• На 7-10 день эмбрион окончательно имплантируется в эндометрий матки, покрывается эпителием, что запускает процесс формирования плаценты, продуцирующий собственный ХГЧ пациентки.

Именно синтез собственного хорионического гонадотропина человека – основной показатель успешной имплантации эмбриона. По истечении 10 дней после переноса врач берет у пациентки на анализы кровь и мочу для установки уровня ХГЧ, а также проводит ультразвуковое обследование матки на наличие плодного яйца.

Процедура ЭКО: общие положения

В зависимости от протокола, экстракорпоральное оплодотворение может включать различные процедуры, но общая схема состоит из нескольких стадий:

• Подготовка. На этом этапе пациентка консультируется с врачом-репродуктологом и проходит ряд диагностических обследований. По их результатам и данным медицинской карты женщины он назначает подходящий протокол ЭКО.
• Стимуляция яичников. Если женщина не проходит ЭКО в естественном цикле, ей назначается курс гормональных инъекций для ускоренного роста фолликулов. Это позволяет увеличить число яйцеклеток, образуемых в ее организме за один менструальный цикл, и тем самым получить больше генетического материала для оплодотворения.
• Пункция яичников и оплодотворение. Для получения ооцитов врач через влагалище прокалывает длинной иглой стенку матки и каждый из созревших фолликулов, извлекая их содержимое. Яйцеклетки передаются в лабораторию, где из них отбираются наиболее жизнеспособные и помещаются в инкубатор. Там они смешиваются с подготовленной спермой, в результате чего происходит оплодотворение.
• Перенос эмбрионов. Оплодотворенные яйцеклетки в течение 3-6 дней культивируются в инкубаторе. Как правило, перенос осуществляется по достижении эмбрионами стадии бластоцисты, которая облегчает их имплантацию в матку. Зародыши с помощью катетера переносятся в маточную полость, после чего пациентке назначается курс поддерживающей гормональной терапии и периодические обследования для установления факта беременности.

Параллельно с культивацией эмбрионов к имплантации подготавливают и эндометрий матки. Он должен достичь определенной стадии развития, при которой закрепление плодного яйца наиболее вероятно. Для этого используются гормональные препараты на основе хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) – гормона, ответственного за адаптацию репродуктивной системы женщины к беременности. Воспаления, гиперплазия, атрофия и другие патологии эндометрия существенно снижают вероятность успешного переноса. Поэтому при наличии таких заболеваний сначала проводится соответствующий курс лечения – только после него врач-репродуктолог проводит подсадку эмбрионов. 

Для оценки качества генетического материала и шансов на успешную имплантацию проводится преимплантационная генетическая диагностика. Для ПГД из эмбриона извлекаются бластомеры, образующиеся при дроблении оплодотворенной зиготы, частицы оболочки и клетки-спутники, образующиеся вскоре после начала деления. Генетический скрининг назначается по следующим показаниям:

• более 2 неудачных попыток экстракорпорального оплодотворения;
• самопроизвольные аборты и замершие беременности в анамнезе;
• возраст матери от 35 лет, отца – от 42 лет и старше;
• низкие показатели спермограммы и тяжелые нарушения сперматогенеза у партнера;
• генетические патологии у одного или обоих родителей, их ближайших родственников.

Сделайте первый шагзапишитесь на прием к врачу!

Записаться на прием к врачу

На практике преимплантационная генетическая диагностика рекомендуется всем женщинам и их половым партнерам, проходящим ЭКО. Эта диагностическая процедура позволяет выявить возможные врожденные нарушения эмбриона, снизить вероятность самопроизвольного аборта и других осложнений беременности.

Короткий протокол ЭКО по дням

Схема стимуляции подбирается врачом индивидуально для каждой женщины. Всего существует два вида коротких протокола:

• с агонистами ГнГРГ;
• с антагонистами ГнГРГ.

ГнГРГ — это гонадотропин-рилизинг-гормон, воздействующий на гипофиз и вызывающий тем самым выработку лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормона.

В зависимости от выбранного варианта процесс по дням будет различаться.

График подбирается индивидуально

Схема короткого протокола с агонистами ГнГРГ по дням

• на 2–3 день менструального цикла начинается прием препаратов с агонистами ГнГРГ для блокады гипофиза;
• стимуляция овуляции происходит параллельно блокаде гипофиза и занимает около 15 дней;
• за 36 часов до начала пункции фолликулов пациентке вводят дозу гормона ХГЧ;
• На 12–15 день ССО проводится пункция.

Далее следует изъятие яйцеклетки под наркозом. В специальных условиях врач проводит искусственное оплодотворение и выращивание эмбрионов в инкубаторе. Для поддержания необходимого гормонального фона женщине назначаются препараты с прогестероном. Через 3–4 дня подросший эмбрион пересаживают в матку.

Схема короткого протокола с антагонистами ГнГРГ по дням

• на 2–3 день менструального цикла начинают стимуляцию овуляции препаратами с антагонистами ГнГРГ. Весь процесс длится около 14 дней;
• ХГЧ вводится за 36 часов до пункции фолликула;
• на 12–14 день ССО проводится пункция.

Последующие этапы не отличаются от предыдущего варианта.

В целом короткий протокол длится 4 недели, как стандартный менструальный цикл. Препараты принимаются строго с определенным промежутком и в указанных дозировках

Важно понимать, что гормональные лекарства могут оказывать сильное воздействие на настроение, вызывать боли или неприятные ощущения в яичниках.

Короткий протокол подразумевает регулярное обследование

Помимо описанных этапов пациентке необходимо проходить регулярное обследование. Через каждые два дня проводится УЗИ для отслеживания созревания фолликулов.

После пересадки эмбриона в матку пациентке также следует регулярно посещать репродуктолога и соблюдать рекомендации. Только через 20 дней после переноса делается контрольный анализ, способный подтвердить наличие беременности.

Эффективность заморозки яйцеклеток

Очевидно, что одним из актуальных вопросов является результативность этого метода сохранения биоматериала для оплодотворения. У медленного замораживания, применявшегося ранее, этот показатель был достаточно низким, что делало процедуру более трудоемкой, сложной и дорогой. Однако, современный уровень развития криотехнологии позволяет 90-95% яйцеклеток сохранить свою жизнеспособность и фертильность после разморозки.

Этот показатель не стоит путать с вероятностью наступления беременности с использованием криоконсервированных ооцитов. Даже при сегодняшнем уровне развития вспомогательных репродуктивных технологий шанс зачать ребенка с первой попытки ЭКО составляет всего 25-30% — что, однако, вполне сравнимо с аналогичным показателем при естественном оплодотворении у абсолютно здоровых пар.

Фертильность замороженных яйцеклеток зависит от множества факторов, среди которых основную роль играют следующие:

• Качество заморозки. Криоконсервация генетического материала только на словах выглядит простой – в реальности это довольно сложная процедура, требующая высокой подготовки и специального оборудования. Поэтому эффективно провести ее могут только в специализированных репродуктологических центрах, где работают квалифицированные и опытные специалисты-репродуктологи. Чтобы проводить заморозку яйцеклеток, клиника должна иметь соответствующую лицензию, подтверждающее качество предоставляемых ею услуг.
• Фертильность спермы. Даже при высокой жизнеспособности самой яйцеклетки зачатие может не наступить при низком качестве мужского семени (например, малой концентрации или подвижности сперматозоидов). Обойти это ограничение позволяют тщательный отбор половых клеток и вспомогательные репродуктивные технологии – например принудительная инъекция сперматозоида в ооцит (ИКСИ), использование донорской спермы и т. д.
• Состояние материнского организма. Зачатие не исчерпывается лишь оплодотворением, то есть слиянием женской и мужской половых клеток. Уже оплодотворенной яйцеклетке необходимо закрепиться в эндометрии матки для дальнейшего развития. Этот процесс может нарушиться, если женщина страдает какими-либо расстройствами репродуктивной системы или общими заболеваниями организма, снижающими детородную функцию. Чтобы уменьшить этот риск, пациентка перед процедурой ЭКО проходит комплексное обследование, в ходе которого выявляются возможные нарушения, мешающие зачатию. Также повысить вероятность успешного наступления беременности, в ее матку подсаживают сразу несколько эмбрионов (чаще всего не более 2).

Сделайте первый шагзапишитесь на прием к врачу!

Записаться на прием к врачу

Многих женщин, решивших пройти ЭКО с использованием замороженных яйцеклеток, также волнует вопрос безопасности этой процедуры. Распространено мнение, что криоконсервация наносит ооцитам ущерб, в том числе на генетическом уровне, что может вызвать самопроизвольное прерывание беременности или врожденные патологии у плода. Однако, научные исследования не подтверждают такой зависимости. Напротив, имеются данные, что прошедшие процедуру заморозки яйцеклетки сохраняют более высокую фертильность, чем «свежие», особенно если речь идет о пациентках старшего возраста.

В медицинском центре «За Рождение» вы можете подробнее узнать, сколько стоит заморозка яйцеклеток, насколько велика вероятность наступления беременности после ЭКО с использованием криоконсервированного биоматериала, как проводится эта процедура и т. д. Для этого запишитесь на прием, оставив электронную заявку на сайте или позвонив по номеру 8 (800) 555-39-66.

Подготовка к ЭКО при патологиях эндометрия

При заболеваниях слизистой оболочки матки пациентка проходит более сложный и продолжительный курс терапии. Первый этап направлен на устранение первичной патологии, которое вызвало негативные изменения в тканях. Например, большое значение при подготовке к ЭКО при хроническом эндометрите имеет прием:

• противовоспалительных и антибактериальных, противовирусных препаратов, которые препятствуют дальнейшему поражению тканей слизистой;
• иммуномодулирующих и антиоксидантных лекарств, улучшающих сопротивляемость организма инфекционным агентам;
• антикоагулянты и препараты, улучшающие кровоснабжение матки и ее слизистой оболочки;
• витамины и минеральные комплексы, оказывающие общеукрепляющее воздействие, стимулирующие рост здоровой эндометриальной ткани.

При эндометриозе, напротив, требуется удаление излишков эндометриальной ткани. Для этого используются хирургические методы в комплексе с препаратами, подавляющими патологический рост слизистой, нормализующих гормональный фон, эндокринную функцию организма и т. д. Сегодняшние технологии позволяют удалить разросшиеся участки эндометрия с минимальными побочными эффектами – например, с помощью электро- или криодеструкции, лазерной вапоризации. В отличие от традиционной хирургической резекции они моментально коагулируют кровеносные сосуды, тем самым предотвращая маточные кровотечения или инфицирование органа.

Для точного выявления патологий проводится гистероскопия эндометрия перед ЭКО. Этот метод исследования заключается в визуальной оценке состояния слизистой с помощью тонкого трубчатого инструмента с оптической или электронно-оптической системой. Она может проводиться одновременно с удалением новообразований с помощью введенного через гистероскоп скальпеля специальной конструкции. Гистероскопия часто дополняется перед ЭКО биопсией эндометрия (извлечением образца ткани для изучения), УЗИ матки и другими способами диагностики.

Можно заморозить

Врачи медицинских центров подвергают операции ооциты, сперматозоиды, эмбрионы, которые могут находиться на любой стадии развития. Кроме того, заморозить можно ткани яичника.

Каждый центр лечения бесплодия использует свои наработки. Этот фактор, а также особенности, существующие в отдельных странах, влияют на то, какие эмбрионы могут подвергаться замораживанию:

— оплодотворенные яйцеклетки;

— 4-х, 8-клеточные эмбрионы;

— бластоцисты.

Раздел «Путь от зиготы к бластоцисте», сайты клиник, могут ознакомить с фотографиями эмбрионов на различных стадиях развития.

Подобной операции подвергают лишь свежие эмбрионы хорошего качества, оставшиеся после перенесения женщине необходимого количества зародышей.

Подобный метод для спермы используется в следующих случаях:

— наличие у мужчины онкологического заболевания, чтобы обеспечить до начала химиотерапии некоторый запас спермы. Впоследствии сперму можно использовать при процедуре ЭКО;

— если партнёру затруднительно вовремя сдать сперму. Подобная ситуация возникает обычно у иногородних пациентов;

— донорство спермы;

— решение мужчины отложить момент отцовства. Поскольку последнее время фертильность мужчин заметно снижается, возможно, подобное решение будет всё более популярным.

https://youtube.com/watch?v=ewl_2NdFp1U

Заморозка ооцитов целесообразна, например, при противопоказаниях к стимуляции яичников или если отсутствует возможность ЭКО в определенный период.

Ооциты очень плохо переносят заморозку, поскольку отличаются огромной хрупкостью. В процессе замораживания,а также размораживания ооцит можно легко повредить. Поэтому оплодотворение яйцеклетки, успешный исход оплодотворения, инсеминации, когда используются криоконсервированные ооциты, снижается до 3-4%.

Ткани замораживают, когда пациентка имеет онкологическое заболевание. После они используются трансплантологами. Процесс замораживания, размораживания уничтожает около 7% фолликулов. Отсутствуют точные данные касательно беременностей, которые наступили после трансплантации. Существует информация, что эндокринная функция восстанавливается примерно через 9-36 месяцев.

Риски после переноса эмбриона

Сам трансфер эмбрионов в маточную полость женщины – процесс быстрый, безопасный и безболезненный. Однако, в редких случаях последующее развитие беременности может быть осложнено:

• интоксикацией с сопутствующими симптомами (тошнотой, диареей, рвотой);
• интенсивной острой или тянущей болью в нижней части живота;
• обильными выделениями из половых путей с явными примесями крови или неясного состава.

Сделайте первый шагзапишитесь на прием к врачу!

Записаться на прием к врачу

Такие симптомы свидетельствуют об определенных патологических процессах, которые происходят в материнском организме. Они могут быть обусловлены предшествующей гормональной терапией, общими системными заболеваниями, травматическим поражением матки при переносе, патологиями половых органов, аутоиммунной реакцией матери на генетический набор плода и другими причинами. В этом случае необходимо срочно обратиться за медицинской помощью. Врач на основании симптоматики и данных медицинских обследований выберет подходящий способ спасти беременность или, при отсутствии иного выбора, назначит ее искусственное прерывание. От того, как вела себя после переноса эмбриона пациентка, он решит, следует ли проводить повторную попытку ЭКО или лучше использовать другие способы борьбы с бесплодием.